Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CTP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417472
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CTP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CTP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CTP Antibody (C-12): sc-518244
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CTP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417472 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SLC25A1 codifica la proteina trasportatrice mitocondriale del citrato (CTP), un carrier della membrana interna che scambia citrato/isocitrato con malato e collega il metabolismo mitocondriale ai programmi biosintetici citosolici. Esportando citrato per la produzione di acetil-CoA dipendente dall’ATP-citrato liasi, la CTP sostiene la sintesi lipidica de novo, l’acetilazione delle proteine e la regolazione epigenetica, influenzando al contempo l’equilibrio redox tramite vie a valle che generano NADPH. L’attività di SLC25A1 si integra con il metabolismo centrale del carbonio, inclusi il ciclo TCA, la glicolisi e i flussi anaplerotici, modulando le risposte cellulari alla disponibilità di nutrienti e allo stress mitocondriale. La disregolazione del trasporto del citrato è stata associata a rimodellamenti metabolici alterati osservati nel cancro, nei disturbi del neurosviluppo e in contesti di segnalazione infiammatoria, rendendo SLC25A1 un nodo utile per studi meccanicistici sul crosstalk mitocondrio–citosol.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC25A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC25A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC25A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC25A1 per lo studio della segnalazione di CTP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SLC25A1 critici per la funzione di CTP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC25A1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CTP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CTP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC25A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CTP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CTP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC25A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC25A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.