CTLA-4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400948-LAC

CTLA4 codifica CTLA-4, un recettore inibitorio di checkpoint immunitario espresso prevalentemente sui linfociti T attivati e sui linfociti T regolatori, che limita il priming dei linfociti T competendo con CD28 per i ligandi CD80/CD86 presenti sulle cellule presentanti l’antigene. Attenuando i segnali costimolatori prossimali del TCR e di CD28, CTLA-4 influenza l’attività a valle delle vie PI3K–AKT e NF-κB, la produzione di citochine e il mantenimento della tolleranza periferica. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CTLA-4 sono state associate a fenotipi di disregolazione immunitaria, inclusi autoimmunità e compromissione dell’omeostasi immunitaria, rendendolo un nodo chiave per lo studio delle soglie di attivazione dei linfociti T e della biologia dei T regolatori. CTLA-4 è inoltre rilevante nella ricerca di immunologia tumorale, dove le vie di checkpoint modulano le risposte immunitarie antitumorali e i meccanismi di evasione immunitaria.

Le particelle di attivazione lentivirale CTLA-4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CTLA4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CTLA-4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CTLA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CTLA-4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CTLA4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.