CTH Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430767-LAC

Il gene murino **Cth** codifica la cistationina gamma-liasi (CTH), un enzima chiave della transulfurazione che converte la cistationina in cisteina, ammoniaca e α-chetobutirrato, collegando il metabolismo della metionina all’omeostasi dei tioli cellulari. Controllando la disponibilità di cisteina e contribuendo alla produzione endogena di idrogeno solforato (H2S), CTH influenza il tamponamento redox, la sintesi del glutatione, la funzione mitocondriale e la segnalazione delle risposte allo stress. L’attività di CTH interseca le vie dello stress ossidativo e la regolazione dell’infiammazione, con una rilevanza riportata per la disregolazione metabolica, la biologia vascolare e la neurobiologia in modelli di malattia. Modulando l’espressione di **Cth** è quindi possibile analizzare il flusso degli amminoacidi solforati, la sensibilità alle ROS e i meccanismi di segnalazione dipendenti da H2S nelle cellule dei mammiferi.

Le particelle di attivazione lentivirale CTH (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cth in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CTH (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cth, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CTH. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cth e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.