CtBP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401865-LAC-2

Il gene umano CTBP2 codifica la C-terminal binding protein 2 (CtBP2), un coregolatore trascrizionale sensibile al NADH che agisce prevalentemente come corepressore associandosi a fattori di trascrizione specifici per la sequenza e a enzimi che modificano la cromatina per regolare programmi di espressione genica. CtBP2 integra lo stato metabolico con il controllo epigenetico attraverso il reclutamento di deacetilasi degli istoni e di altri complessi di rimodellamento, influenzando processi quali la transizione epitelio–mesenchimale, la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e la trascrizione associata alle sinapsi neuronali (inclusi ruoli legati all’isoforma CtBP2/RIBEYE). La disregolazione delle reti trascrizionali dipendenti da CTBP2 è stata associata alla progressione tumorale e alla biologia delle metastasi, nonché a fenotipi neuroevolutivi e del sistema sensoriale, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici. L’editing genomico di CTBP2 consente l’analisi funzionale dei circuiti di repressione trascrizionale, la mappatura delle dipendenze nelle interazioni proteina–proteina e la dissezione degli effetti regolatori specifici di via in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale CtBP2 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CTBP2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CtBP2 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CTBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CtBP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CTBP2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.