CT-R Plasmide Double Nickase (h): sc-404578-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CT-R Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CT-R Double Nickase Plasmid (h) e il CT-R Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CALCR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CT-R Antibody (2F7): sc-293299
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CT-R Plasmide Double Nickase (h) | sc-404578-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CT-R Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404578-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCR codifica il recettore umano della calcitonina (CT-R), un recettore accoppiato a proteine G di classe B che lega la calcitonina e si accoppia principalmente alla via Gs/adenilil ciclasi per aumentare i livelli di cAMP, con un ulteriore accoppiamento alla fosfolipasi C e a vie a valle calcio-dipendenti in modo dipendente dal contesto. L’attività di CT-R regola la funzione degli osteoclasti e il rimodellamento osseo, integrandosi con MAPK e altre reti di secondi messaggeri che influenzano la differenziazione cellulare e l’attività di riassorbimento. Lo splicing alternativo può generare isoforme recettoriali con proprietà di segnalazione distinte, contribuendo a risposte specifiche di tessuto nell’osso e in altri tessuti responsivi alla calcitonina. La disregolazione della segnalazione di CALCR è stata implicata in disturbi del metabolismo scheletrico e in alterazioni dell’espressione del recettore osservate in molteplici tipi di tumore, a supporto del suo valore come bersaglio meccanicistico per studi di via di segnalazione e di stato cellulare.
CT-R Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CALCR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CALCR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CALCR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CALCR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.