Plasmide Double Nickase (h) CT-R: sc-404578-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CT-R correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CT-R Double Nickase (h) et le plasmide CT-R Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CALCR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CT-R Antibody (2F7): sc-293299
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CT-R | sc-404578-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CT-R | sc-404578-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCR code pour le récepteur humain de la calcitonine (CT‑R), un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) de classe B qui se lie à la calcitonine et s’associe principalement à la voie Gs/adénylate cyclase afin d’augmenter l’AMPc, avec un couplage additionnel à la phospholipase C et à des voies en aval dépendantes du calcium, de manière contextuelle. L’activité du CT‑R régule la fonction des ostéoclastes et le remodelage osseux, en s’intégrant aux réseaux MAPK et à d’autres seconds messagers qui influencent la différenciation cellulaire et l’activité de résorption. L’épissage alternatif peut produire des isoformes du récepteur aux propriétés de signalisation distinctes, contribuant à des réponses spécifiques des tissus dans l’os et d’autres tissus sensibles à la calcitonine. Un dérèglement de la signalisation de CALCR a été impliqué dans des troubles du métabolisme squelettique ainsi que dans des modifications de l’expression du récepteur observées dans de multiples types tumoraux, ce qui étaye son intérêt comme cible mécanistique pour des études de voies et d’états cellulaires.
CT-R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CALCR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CALCR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CALCR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CALCR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.