CRTAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405828

Panoramica

CRTAP (cartilage associated protein) codifica un componente residente nel reticolo endoplasmatico del complesso di 3-idrossilazione della prolina, che include anche P3H1/LEPRE1 e la ciclofilina B (PPIB). Questo complesso coordina la modificazione post-traduzionale, il ripiegamento e il controllo qualità dei collageni fibrillari, sostenendo l’assemblaggio della matrice extracellulare e l’integrità del tessuto connettivo. La funzione di CRTAP collega la biosintesi del collagene alle vie di omeostasi proteica del RE, inclusi il ripiegamento assistito da chaperoni e la sorveglianza della proteostasi. La perdita dell’attività di CRTAP è associata a forme recessive di osteogenesi imperfetta e a displasie scheletriche correlate, caratterizzate da una maturazione del collagene e un’organizzazione della matrice difettose.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRTAP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CRTAP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CRTAP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CRTAP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRTAP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CRTAP per lo studio della segnalazione di CRTAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CRTAP critici per la funzione di CRTAP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CRTAP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CRTAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CRTAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CRTAP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CRTAP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CRTAP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CRTAP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CRTAP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.