CRISP-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417129

Panoramica

CRISP3 codifica la proteina secretoria ricca di cisteina 3 (CRISP-3), un membro secreto della superfamiglia CAP, particolarmente abbondante nei tessuti esocrini e in compartimenti legati al sistema immunitario, come i granuli dei neutrofili. CRISP-3 è coinvolta in interazioni extracellulari proteina–proteina che influenzano le risposte immunitarie innate, la secrezione epiteliale e la segnalazione regolata da proteasi all’interno dei microambienti tissutali. Un’espressione alterata di CRISP3 è stata riportata in diverse condizioni associate all’infiammazione e in molteplici contesti oncologici, a supporto del suo impiego come gene associato a biomarcatori negli studi sulla biologia tumorale e sul dialogo immuno–epiteliale. Nei modelli cellulari, la perturbazione di CRISP-3 è comunemente utilizzata per indagare i programmi di secrezione, le vie di risposta allo stress e il rimodellamento del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRISP-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CRISP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CRISP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CRISP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRISP-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CRISP3 per lo studio della segnalazione di CRISP-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CRISP3 critici per la funzione di CRISP-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CRISP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CRISP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CRISP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CRISP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CRISP-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CRISP-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CRISP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CRISP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.