CRF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400770-ACT

Il gene umano **CRH** codifica l’ormone di rilascio della corticotropina (CRF), un neuropeptide che avvia l’asse ipotalamo–ipofisi–surrene (HPA) stimolando la secrezione di ACTH da parte dei corticotrofi ipofisari e coordinando le risposte sistemiche allo stress. Il CRF segnala principalmente attraverso **CRHR1/CRHR2**, attivando le vie **Gs–adenilato ciclasi–cAMP–PKA** e programmi trascrizionali a valle che modulano processi neuroendocrini, immunitari e autonomici. Nel cervello e nei tessuti periferici, **CRH/CRF** contribuisce alla regolazione di comportamenti tipo-ansioso, dell’arousal, dell’appetito e del tono infiammatorio tramite circuiti neuroendocrini integrati. Un’espressione e una segnalazione di CRH deregolate sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici legati allo stress e ad alterazioni dell’omeostasi endocrina, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici dei circuiti dello stress e delle reti geniche regolate dagli ormoni.

CRF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CRH senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CRF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CRH nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CRH, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CRF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CRH nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CRF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CRF nelle cellule tumorali con espressione di CRH silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.