Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CREST Plasmide Double Nickase (h): sc-403134-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CREST Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CREST Double Nickase Plasmid (h) e il CREST Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SS18L1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CREST Antibody (D-7): sc-515827
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CREST Plasmide Double Nickase (h) | sc-403134-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CREST Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403134-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SS18L1 codifica CREST, un regolatore trascrizionale arricchito nei neuroni che collega il rimodellamento della cromatina all’espressione genica dipendente dall’attività. CREST interagisce con il complesso BAF (SWI/SNF) e con corepressori quali BRG1 e le HDAC per modulare i programmi di differenziazione neuronale, la morfogenesi dendritica e la plasticità sinaptica. Attraverso questi meccanismi epigenetici e trascrizionali, CREST influenza la processazione dell’RNA e le vie di risposta allo stress che contribuiscono all’omeostasi neuronale. La disregolazione delle reti associate a CREST è stata collegata a fenotipi neurodegenerativi e ad alterazioni della connettività neuronale, rendendo SS18L1 un locus utile per studi meccanicistici in modelli del sistema nervoso.
CREST Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SS18L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SS18L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SS18L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SS18L1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.