CREB3L3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402596-ACT

CREB3L3 (noto anche come CREBH) codifica un fattore di trascrizione bZIP residente nel reticolo endoplasmatico (ER) che viene attivato tramite proteolisi intramembrana regolata durante stress metabolico e infiammatorio, consentendo la traslocazione nel nucleo e il controllo trascrizionale di programmi genici epatici. Coordina l’omeostasi di lipidi e glucosio modulando vie coinvolte nel metabolismo dei trigliceridi, nell’ossidazione degli acidi grassi e nelle risposte di fase acuta, con effetti a valle sul rimodellamento di apolipoproteine e lipoproteine. L’attività di CREB3L3 interseca la segnalazione dello stress dell’ER e le reti dell’immunità innata, collegando lo stato nutrizionale alle risposte trascrizionali degli epatociti. La disregolazione di CREB3L3 è stata associata a fenotipi cardiometabolici, tra cui ipertrigliceridemia, patobiologia del fegato grasso e infiammazione sistemica, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in modelli di malattie metaboliche.

CREB3L3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CREB3L3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CREB3L3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CREB3L3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CREB3L3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CREB3L3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CREB3L3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CREB3L3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CREB3L3 nelle cellule tumorali con espressione di CREB3L3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.