Plásmido CRISPR de Activación (h) CREB3L1: sc-405316-ACT

CREB3L1 (proteína 3 similar a la proteína de unión al elemento de respuesta a cAMP 1) es un factor de transcripción bZIP anclado a la membrana que se activa mediante proteólisis intramembranosa regulada y se transloca al núcleo para controlar programas de expresión génica vinculados al estrés del retículo endoplásmico y a la adaptación de la vía secretora. Influye en la producción de matriz extracelular y en redes transcripcionales asociadas a la diferenciación, integrando señales que coordinan la biosíntesis de colágeno, las respuestas al estrés celular y la proteostasis. La actividad de CREB3L1 se ha implicado en contextos de remodelado tisular alterado y transiciones de estado celular, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de programas transcripcionales tipo fibrosis y de cambios asociados a tumores en invasión, metástasis y tolerancia al estrés. Como regulador transcripcional, ofrece un nodo abordable para desentrañar cómo la señalización del estrés del RE se entrecruza con el remodelado de la matriz y la expresión génica específica de linaje.

CREB3L1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CREB3L1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CREB3L1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CREB3L1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CREB3L1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CREB3L1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CREB3L1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CREB3L1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CREB3L1 en células tumorales con expresión de CREB3L1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.