CRABP-I Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-405485-LAC-2

Il gene umano CRABP1 codifica la cellular retinoic acid-binding protein 1 (CRABP-I), un trasportatore citosolico ad alta affinità che regola la disponibilità e il tamponamento dell’acido retinoico intracellulare, modellando la dinamica dei gradienti dei retinoidi e la segnalazione a valle mediata dai recettori dell’acido retinoico. Controllando la ripartizione e il metabolismo dei retinoidi, CRABP-I influenza programmi trascrizionali legati alla differenziazione e alla proliferazione cellulari e alla strutturazione dello sviluppo, interfacciandosi inoltre con processi quali la funzione neuronale e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni dell’espressione di CRABP1 e della gestione dei retinoidi sono state riportate in contesti rilevanti per la biologia del cancro, per fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi e per la disregolazione metabolica, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici. Il gene editing di CRABP1 facilita la dissezione delle vie di trasporto dei retinoidi e delle reti geniche responsivi all’acido retinoico, consentendo esperimenti di perturbazione mirata in modelli cellulari per valutare conseguenze fenotipiche e circuiti regolatori.

Le particelle di attivazione lentivirale CRABP-I (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CRABP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CRABP-I (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CRABP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CRABP-I. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CRABP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.