CPI-17 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401966-LAC

PPP1R14A codifica CPI-17, un inibitore della fosfatasi della catena leggera della miosina (MLCP/PP1) dipendente dalla fosforilazione, che amplifica la segnalazione contrattile mantenendo la fosforilazione della catena leggera regolatoria della miosina. In seguito all’attivazione da parte di PKC e di input collegati a RhoA/ROCK, CPI-17 integra le vie di sensibilizzazione al Ca²⁺ per modulare il tono della muscolatura liscia, la tensione del citoscheletro e la dinamica actomiosinica. Questo nodo regolatorio influenza la contrattilità guidata dai GPCR, la migrazione cellulare e le proprietà di barriera nei tessuti vascolari e viscerali. Una disregolazione della segnalazione PPP1R14A/CPI-17 è stata associata ad alterazioni dell’ipercontrattilità della muscolatura liscia e a processi di rimodellamento rilevanti per la biologia delle patologie cardiovascolari e delle vie aeree, supportandone l’impiego come leva meccanicistica negli studi di segnalazione e di fisiologia tissutale.

Le particelle di attivazione lentivirale CPI-17 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PPP1R14A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CPI-17 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PPP1R14A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CPI-17. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PPP1R14A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.