Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CPI-17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401966
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CPI-17 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CPI-17, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CPI-17 Antibody (F-4): sc-48406
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CPI-17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401966 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PPP1R14A codifica CPI-17, un inibitore della fosfatasi della catena leggera della miosina (MLCP) dipendente dalla fosforilazione, che amplifica la segnalazione contrattile stabilizzando la fosforilazione della catena leggera regolatoria della miosina. Dopo la fosforilazione da parte di chinasi quali PKC e le vie associate a Rho, CPI-17 sopprime l’attività catalitica di PP1 all’interno di MLCP, regolando il tono della muscolatura liscia, la dinamica del citoscheletro e la sensibilizzazione al calcio. Questo nodo regolatorio integra la segnalazione mediata da GPCR e RhoA/ROCK con il rimodellamento actomiosinico e i programmi di motilità cellulare. Un’attività deregolata di PPP1R14A/CPI-17 è stata collegata ad anomalie della contrattilità della muscolatura liscia e a contesti di rimodellamento proliferativo, sostenendone lo studio in modelli di fisiopatologia cardiovascolare, delle vie aeree e gastrointestinale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CPI-17 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP1R14A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP1R14A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP1R14A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CPI-17.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP1R14A per lo studio della segnalazione di CPI-17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PPP1R14A critici per la funzione di CPI-17
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP1R14A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CPI-17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CPI-17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP1R14A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CPI-17 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CPI-17 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP1R14A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP1R14A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.