CPEB4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413379-ACT

La CPEB4 umana (cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4) è un regolatore legante l’RNA che controlla la poliadenilazione citoplasmatica, la stabilità dell’mRNA e la traduzione attraverso il riconoscimento delle sequenze CPE nelle regioni 3′ UTR. Coordinando programmi di espressione genica post-trascrizionali, CPEB4 influenza la progressione del ciclo cellulare, la plasticità neuronale e le risposte adattative allo stress, e si interfaccia con reti di segnalazione che rimodellano l’output traduttivo durante la differenziazione e le sfide metaboliche. Un’espressione o un’attività di CPEB4 deregolate sono state associate ad alterazioni della proteostasi e a firme aberranti di espressione genica in ambito oncologico, in contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi e in fenotipi infiammatori. Queste proprietà rendono CPEB4 un nodo utile per analizzare i regoloni dell’RNA, i meccanismi di controllo della traduzione e il riorientamento dei pathway in condizioni rilevanti per la patologia.

CPEB4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CPEB4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CPEB4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CPEB4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CPEB4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CPEB4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CPEB4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CPEB4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CPEB4 nelle cellule tumorali con espressione di CPEB4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.