Plásmido CRISPR de Activación (h) CoREST: sc-402066-ACT

RCOR1 codifica CoREST, un correpresor central de la transcripción que actúa como andamiaje de complejos modificadores de la cromatina que contienen REST, HDAC1/2 y LSD1/KDM1A para regular la acetilación de histonas proximal al promotor y los estados de metilación de H3K4. A través de estas interacciones, CoREST coordina el control epigenético de programas génicos neuronales, la diferenciación y el mantenimiento de la identidad celular, a la vez que influye en redes transcripcionales del ciclo celular y de respuesta al estrés. La actividad desregulada de RCOR1/CoREST se ha implicado en programas anómalos de represión de la cromatina observados en contextos neurodel desarrollo y neurodegenerativos, así como en cánceres en los que la remodelación epigenética favorece estados de linaje alterados. Como regulador nodal de la represión transcripcional, RCOR1 se estudia con frecuencia en vías que vinculan la arquitectura de la cromatina con la plasticidad de la expresión génica.

CoREST El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RCOR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CoREST El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RCOR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RCOR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CoREST. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RCOR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CoREST en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CoREST en células tumorales con expresión de RCOR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.