Contactin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422111

Panoramica

Cntn3 codifica la contactina 3, una molecola di adesione cellullare della superfamiglia delle immunoglobuline ancorata tramite GPI, arricchita nel sistema nervoso, che supporta la crescita dei neuriti, la guida assonale e l’organizzazione delle sinapsi. La contactina 3 partecipa alle interazioni tra contactine della famiglia L1 e recettori sulla superficie neuronale, contribuendo al riconoscimento cellula-cellula e all’assemblaggio dei circuiti durante lo sviluppo e la maturazione. Attraverso ruoli nella segnalazione dipendente dall’adesione e nell’organizzazione dei microdomini di membrana, CNTN3 influenza programmi di connettività e plasticità rilevanti per fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici. Cntn3 nel topo rappresenta quindi un utile punto di partenza per analizzare i determinanti molecolari della specificità del cablaggio e del rimodellamento delle reti dipendente dall’attività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Contactin 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cntn3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cntn3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cntn3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Contactin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cntn3 per lo studio della segnalazione di Contactin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cntn3 critici per la funzione di Contactin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cntn3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Contactin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Contactin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cntn3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Contactin 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Contactin 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cntn3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cntn3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.