Contactin 3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422111-ACT

Cntn3 codifica la contactina 3, una molecola di adesione cellulare della superfamiglia delle immunoglobuline ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI), arricchita nel sistema nervoso. La contactina 3 contribuisce alla crescita dei neuriti, alla guida assonale e all’organizzazione delle sinapsi mediando il riconoscimento cellula-cellula sulla superficie neuronale e modellando la connettività durante lo sviluppo e la maturazione. Attraverso le sue funzioni di adesione e di “scaffold”, CNTN3 interagisce con vie di segnalazione che regolano l’organizzazione della membrana, l’assemblaggio dei circuiti neuronali e la plasticità dipendente dall’attività. Alterazioni della segnalazione della famiglia CNTN sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, rendendo Cntn3 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul cablaggio cerebrale e sulla funzione sinaptica in modelli murini.

Contactin 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cntn3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Contactin 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cntn3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cntn3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Contactin 3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cntn3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Contactin 3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Contactin 3 nelle cellule tumorali con espressione di Cntn3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.