connexin 62 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405882

Panoramica

GJA10 codifica la connexina 62, una subunità dei canali delle giunzioni comunicanti (gap junction) che si assembla in connexoni per consentire lo scambio intercellulare diretto di ioni e piccoli metaboliti. L’accoppiamento mediato dalle connexine favorisce la sincronizzazione elettrica e metabolica, contribuendo a processi quali l’omeostasi tissutale, il coordinamento del ciclo cellulare e le risposte allo stress cellulare attraverso una permeabilità giunzionale regolata. Alterazioni dell’espressione delle connexine o del gating dei canali sono ampiamente associate a una comunicazione cellula-cellula compromessa, con effetti a valle sui programmi di differenziamento e sulle reti di segnalazione, incluse la dinamica del calcio e le vie dipendenti dalle chinasi. In quanto membro della famiglia delle connexine, la connexina 62 rappresenta un bersaglio per studiare come il rimodellamento delle gap junction influenzi fenotipi rilevanti per la malattia nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 62 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GJA10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GJA10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GJA10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina connexin 62.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GJA10 per lo studio della segnalazione di connexin 62, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GJA10 critici per la funzione di connexin 62
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GJA10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal connexin 62 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal connexin 62 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GJA10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal connexin 62 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR connexin 62 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GJA10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GJA10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.