Plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 62 (h): sc-405882

Présentation

GJA10 code la connexine 62, une sous-unité de canal des jonctions communicantes qui s’assemble en connexons afin de permettre l’échange intercellulaire direct d’ions et de petits métabolites. Le couplage médié par les connexines favorise la synchronisation électrique et métabolique, contribuant à des processus tels que l’homéostasie tissulaire, la coordination du cycle cellulaire et les réponses au stress cellulaire via une perméabilité jonctionnelle régulée. Une expression altérée des connexines ou des modifications du gating (ouverture/fermeture) des canaux est largement associée à une perturbation de la communication cellule–cellule, avec des effets en aval sur les programmes de différenciation et les réseaux de signalisation, notamment la dynamique du calcium et les voies dépendantes des kinases. En tant que membre de la famille des connexines, la connexine 62 constitue une cible pour étudier comment le remodelage des jonctions communicantes influence des phénotypes pertinents pour les maladies dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 62 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GJA10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GJA10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GJA10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine connexin 62.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GJA10 pour l'étude de la signalisation de connexin 62, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GJA10 essentiels à la fonction de connexin 62
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GJA10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le connexin 62 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le connexin 62 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GJA10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le connexin 62 plasmide HDR (h) et le connexin 62 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GJA10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GJA10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.