Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
connexin 43 Plasmide Double Nickase (h): sc-400241-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- connexin 43 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il connexin 43 Double Nickase Plasmid (h) e il connexin 43 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GJA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: connexin 43 Antibody (F-7): sc-271837
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
connexin 43 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 43 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GJA1** codifica la **connessina 43 (Cx43)**, una delle principali proteine delle giunzioni comunicanti (gap junction), che si assembla in **connexoni esamerici** per formare canali intercellulari in grado di consentire lo scambio diretto di ioni e piccoli metaboliti. Attraverso la comunicazione intercellulare mediata dalle gap junction, Cx43 regola l'accoppiamento elettrico, la segnalazione del calcio, l'omeostasi tissutale e le risposte coordinate allo stress, con ruoli di rilievo nella conduzione cardiaca, nella riparazione delle ferite e nella definizione dei pattern durante lo sviluppo. La connessina 43 è controllata dinamicamente da traffico e turnover dipendenti dalla fosforilazione, collegandosi a vie che coinvolgono PKC, MAPK/ERK e il rimodellamento del citoscheletro. Alterazioni dell'espressione di GJA1 o della funzione dei suoi canali sono state associate a fenotipi aritmogeni, a una riparazione tissutale compromessa e a cambiamenti, legati al cancro, nella comunicazione cellula-cellula e nei processi di invasione.
connexin 43 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GJA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GJA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GJA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GJA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.