connexin 37 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407258

Panoramica

GJA4 codifica per la connexina 37 (Cx37), una proteina canale delle gap junction che si assembla in connexoni per consentire lo scambio diretto tra cellule di ioni e piccoli metaboliti. L’accoppiamento dipendente da Cx37 contribuisce all’omeostasi vascolare coordinando la segnalazione tra cellule endoteliali e muscolari lisce coinvolta nelle risposte allo stress da taglio, nel controllo della proliferazione e nella segnalazione infiammatoria. Alterazioni dell’espressione di GJA4 o della funzione del canale sono state associate a disfunzione vascolare e a tratti cardiometabolici, e vengono frequentemente studiate in contesti quali l’aterosclerosi e i meccanismi legati alla trombosi. Come componente della comunicazione mediata da gap junction, la connexina 37 si integra con vie più ampie che regolano la funzione di barriera dei tessuti, la regolazione del ciclo cellulare e il comportamento multicellulare coordinato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 37 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GJA4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GJA4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GJA4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina connexin 37.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GJA4 per lo studio della segnalazione di connexin 37, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GJA4 critici per la funzione di connexin 37
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GJA4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal connexin 37 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal connexin 37 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GJA4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal connexin 37 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR connexin 37 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GJA4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GJA4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.