connexin 37 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420559-ACT

Il gene murino **Gja4** codifica la **connessina 37 (Cx37)**, una subunità dei canali delle giunzioni comunicanti (gap junction) che si assembla in connessoni per mediare la comunicazione intercellulare diretta attraverso ioni e piccoli metaboliti. L’accoppiamento dipendente da Cx37 contribuisce a coordinare la funzione endoteliale, il tono vascolare e la segnalazione tra muscolo liscio ed endotelio, influenzando processi quali le risposte allo stress da shear, il controllo del ciclo cellulare e l’omeostasi tissutale. Nel sistema vascolare e linfatico, alterazioni della segnalazione mediata dalle connessine sono state associate ad angiogenesi disregolata, infiammazione e rimodellamento vascolare, rendendo **Gja4** un locus utile per studiare i meccanismi alla base di fenotipi cardiovascolari e linfatici. Poiché la composizione delle gap junction determina la propagazione dei segnali tra cellule adiacenti, la modulazione di **Gja4** è rilevante anche per indagini sull’integrità della barriera e sul controllo del comportamento cellulare da parte del microambiente.

connexin 37 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gja4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

connexin 37 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gja4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gja4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di connexin 37. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gja4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da connexin 37 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via connexin 37 nelle cellule tumorali con espressione di Gja4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.