connexin 26 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402132-LAC

GJB2 codifica la connessina 26, una proteina dei canali delle giunzioni comunicanti (gap junction) che si assembla in connessoni per mediare lo scambio intercellulare diretto di ioni e piccoli metaboliti, sostenendo l’accoppiamento elettrico e metabolico. La connessina 26 regola l’omeostasi tissutale coordinando la segnalazione negli epiteli e nei tessuti sensoriali, con effetti sulla differenziazione cellulare, sulle risposte allo stress e sulla funzione di barriera. Un’alterata espressione di GJB2 o un’alterazione della funzione dei canali della connessina 26 è fortemente associata alla perdita uditiva ereditaria e ad altri disturbi della fisiologia epiteliale, rendendola un bersaglio ampiamente utilizzato nei modelli di biologia cocleare e di comunicazione tramite gap junction. In ambito di ricerca, la connessina 26 rappresenta un punto di accesso gestibile per studiare la dinamica delle gap junction, la connettività cellulare e il controllo trascrizionale delle proteine giunzionali.

Le particelle di attivazione lentivirale connexin 26 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GJB2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale connexin 26 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GJB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di connexin 26. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GJB2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.