Conductin Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419278-LAC

Axin2 nel topo codifica Conductin, una proteina scaffold che agisce come regolatore chiave di feedback negativo della segnalazione canonica Wnt/β-catenina. Conductin promuove il turnover della β-catenina coordinando i componenti del complesso di degradazione, influenzando così programmi trascrizionali che controllano il mantenimento delle cellule staminali, la proliferazione e la differenziazione. In quanto gene bersaglio diretto di Wnt, l’espressione di Axin2 è ampiamente utilizzata come indicatore dell’attività della via e delle dinamiche di segnalazione oscillatoria durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Una segnalazione Wnt deregolata legata ad AXIN2/Conductin è implicata nella tumorigenesi, in difetti di patterning scheletrico e craniofacciale e nel rimodellamento dell’epitelio intestinale, rendendola rilevante per modelli di biologia del cancro e di processi rigenerativi.

Le particelle di attivazione lentivirale Conductin (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Axin2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Conductin (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Axin2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Conductin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Axin2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.