Complexin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406799

Panoramica

CPLX2 codifica la complexina-2, una proteina citosolica presinaptica che si lega ai complessi SNARE assemblati per regolare il priming delle vescicole sinaptiche e l’esocitosi innescata dal calcio. Modulando la probabilità di fusione delle vescicole e il rilascio sincrono di neurotrasmettitori, la complexina-2 contribuisce alla neurotrasmissione dipendente dall’attività e alla plasticità sinaptica a breve termine. Le disfunzioni associate a CPLX2 sono state studiate nel contesto di un’alterata bilancia eccitatoria/inibitoria e di fenotipi a livello di circuito rilevanti per disturbi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, nonché di cambiamenti sinaptici associati alla neurodegenerazione. Queste caratteristiche rendono CPLX2 un nodo utile per analizzare la fusione di membrana mediata da SNARE, la segnalazione Ca2+-dipendente e il controllo del ciclo delle vescicole presinaptiche in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Complexin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CPLX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CPLX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CPLX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Complexin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CPLX2 per lo studio della segnalazione di Complexin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CPLX2 critici per la funzione di Complexin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CPLX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Complexin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Complexin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CPLX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Complexin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Complexin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CPLX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CPLX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.