COMMD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404544-ACT

COMMD1 (copper metabolism domain containing 1) è una proteina adattatrice umana multifunzionale che coordina la segnalazione dipendente dall’ubiquitina e il trafficking delle proteine. È nota soprattutto per la modulazione dell’output trascrizionale di NF-κB attraverso interazioni con il complesso IKK e con le ubiquitin ligasi di tipo Cullin-RING, contribuendo così a plasmare i programmi genici dell’infiammazione e della risposta allo stress. COMMD1 partecipa anche allo smistamento endosomiale e al turnover delle proteine di membrana, con effetti a valle su vie quali la segnalazione dell’ipossia e l’omeostasi degli ioni metallici. Un’attività deregolata di COMMD1 è stata associata, in sistemi sperimentali, ad alterazioni della segnalazione infiammatoria, a perturbazioni nella gestione del rame e a fenotipi rilevanti per la biologia del cancro e per la funzione epatocellulare.

COMMD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COMMD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

COMMD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COMMD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COMMD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di COMMD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COMMD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da COMMD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via COMMD1 nelle cellule tumorali con espressione di COMMD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.