COL9A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405807-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL9A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL9A1 Double Nickase Plasmid (h) e il COL9A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL9A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COL9A1 Antibody (H-7): sc-376969
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL9A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405807-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL9A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405807-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL9A1 codifica la catena alfa-1 del collagene di tipo IX, un collagene FACIT che si associa alle fibrille di collagene di tipo II e contribuisce all’organizzazione strutturale della cartilagine ialina e di altri tessuti ricchi di matrice extracellulare. Attraverso le sue interazioni con collagene fibrillare e proteoglicani, COL9A1 supporta l’assemblaggio della matrice, la stabilità delle fibrille e le proprietà biomeccaniche importanti per l’omeostasi dei condrociti. L’attività di COL9A1 è collegata all’organizzazione della matrice extracellulare e ai processi di sviluppo della cartilagine, che si intersecano con le vie di rimodellamento del tessuto connettivo. La compromissione genetica o l’alterata espressione di COL9A1 è stata associata a fenotipi di degenerazione cartilaginea e a condrodisplasie ereditarie, a conferma della sua rilevanza per studi di biologia scheletrica e dei meccanismi delle patologie articolari.
COL9A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL9A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL9A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL9A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL9A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.