COL6A2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403209-NIC

COL6A2 codifica la catena α2 del collagene di tipo VI, un componente chiave della matrice extracellulare che si assembla con COL6A1 e COL6A3 in reti microfibrillari che circondano molti tipi cellulari. Questa matrice di collagene VI sostiene l’architettura tissutale, l’adesione cellula–matrice e la meccano-trasduzione, influenzando processi come la miogenesi, il comportamento dei fibroblasti e il rimodellamento della matrice extracellulare. La funzione di COL6A2 interagisce con la segnalazione mediata da integrine e dal complesso associato al distroglicano e influenza la sopravvivenza e le risposte allo stress dipendenti dalla matrice. Varianti patogene di COL6A2 sono associate alle miopatie correlate al collagene VI, tra cui la distrofia muscolare congenita di Ullrich e la miopatia di Bethlem, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sull’integrità muscolare e sulla disfunzione della matrice extracellulare.

COL6A2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL6A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL6A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL6A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL6A2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.