Plásmido CRISPR de Activación (h) COL4A1: sc-401792-ACT

COL4A1 codifica la cadena α1 del colágeno tipo IV, un componente estructural central de las membranas basales que se ensambla en redes heterotriméricas para sostener la arquitectura tisular y la función de barrera. Mediante interacciones con lamininas, nidógenos, perlecano e integrinas, COL4A1 influye en la organización de la matriz extracelular, la mecanotransducción y los programas de adhesión celular que determinan la estabilidad vascular y el desarrollo de los órganos. La alteración de la integridad de la membrana basal dependiente de COL4A1 se asocia con patología de pequeños vasos y fenotipos conectivos multisistémicos, lo que refleja su papel central en la homeostasis microvascular. Como gen de la matriz de la membrana basal, COL4A1 se estudia con frecuencia en biología endotelial, remodelación asociada a fibrosis y vías de señalización de la matriz extracelular.

COL4A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL4A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL4A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL4A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL4A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL4A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL4A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL4A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL4A1 en células tumorales con expresión de COL4A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.