COL2A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400359

Panoramica

COL2A1 codifica la catena α1 del collagene di tipo II, un importante collagene fibrillare che costituisce l’impalcatura strutturale della cartilagine ialina e contribuisce alle proprietà biomeccaniche della matrice extracellulare. Attraverso l’assemblaggio in fibrille di collagene II e le interazioni con i proteoglicani, COL2A1 sostiene la differenziazione dei condrociti, l’organizzazione della matrice e l’omeostasi della cartilagine durante lo sviluppo scheletrico. L’espressione di COL2A1 è regolata da programmi trascrizionali condrogenici, come le vie guidate da SOX9, e si coordina con le reti di processamento del collagene, secrezione e rimodellamento della matrice extracellulare. L’alterazione genetica o la disregolazione di COL2A1 è associata a uno spettro di patologie ereditarie della cartilagine e dello scheletro, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio della biologia della matrice extracellulare e della patologia dei condrociti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL2A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL2A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL2A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL2A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL2A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL2A1 per lo studio della segnalazione di COL2A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL2A1 critici per la funzione di COL2A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL2A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL2A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL2A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL2A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL2A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL2A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL2A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL2A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.