COL1A2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400598-ACT

COL1A2 kodiert die Pro‑α2(I)-Kette von Kollagen Typ I, einem zentralen fibrillären Kollagen, das sich zu Heterotrimeren zusammenlagert und Bindegeweben wie Dermis, Sehne, Knochen und vaskulärem Stroma Zugfestigkeit verleiht. Seine Expression wird während der Ablagerung und des Umbaus der extrazellulären Matrix (ECM) streng reguliert und ist in TGF‑β/SMAD‑Signalwege, integrinvermittelte Zelladhäsion sowie Wege der Kollagenfibrillogenese eingebunden, die Gewebearchitektur und Mechanotransduktion prägen. Eine fehlregulierte COL1A2‑Transkription oder pathogene Varianten stören die Kollagenassemblierung und die Matrixhomöostase und tragen zu erblichen Bindegewebserkrankungen sowie fibrotischen Umbauphänotypen bei. In der biomedizinischen Forschung dient COL1A2 als wichtiger Marker und Effektor der Fibroblastenaktivierung, des ECM‑Turnovers und stromaler Beiträge zu Entzündung und Tumormikroumgebungen.

COL1A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COL1A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COL1A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COL1A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COL1A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COL1A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COL1A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COL1A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COL1A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COL1A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.