COL18A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402281

Panoramica

COL18A1 codifica il collagene XVIII, un collagene di tipo multiplexina associato alla membrana basale che contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare e alla compartimentalizzazione dei tessuti. La processamento proteolitico della sua regione C-terminale genera l’endostatina, un frammento bioattivo che modula il comportamento delle cellule endoteliali e la segnalazione angiogenica attraverso interazioni con proteoglicani eparan solfato e integrine. Attraverso i suoi ruoli nell’integrità della membrana basale e nell’omeostasi vascolare, COL18A1 influenza l’adesione e la migrazione cellulare e i segnali del microambiente che modellano lo sviluppo e il rimodellamento delle ferite. L’alterazione genetica di COL18A1 è associata a fenotipi dello sviluppo e oculari ed è spesso studiata nel contesto dell’angiogenesi, della fibrosi e della biologia del microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL18A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL18A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL18A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL18A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL18A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL18A1 per lo studio della segnalazione di COL18A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL18A1 critici per la funzione di COL18A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL18A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL18A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL18A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL18A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL18A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL18A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL18A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL18A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.