COL12A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402361

Panoramica

COL12A1 codifica la catena alfa 1 del collagene di tipo XII, un collagene associato alle fibrille con tripla elica interrotta (FACIT) che si localizza nella matrice extracellulare e si associa alle fibrille di collagene di tipo I. Collegando i collagene fibrillari ad altri componenti della matrice, COL12A1 contribuisce alla resistenza alla trazione dei tessuti, alla meccanotrasduzione e all’organizzazione della matrice pericellulare, influenzando l’adesione e la migrazione cellulare. La sua funzione è strettamente connessa alle vie di rimodellamento della matrice extracellulare e alla segnalazione mediata dalle integrine che modellano l’architettura stromale durante lo sviluppo e la riparazione. Alterazioni dell’espressione di COL12A1 o varianti del gene sono state implicate in fenotipi ereditari del tessuto connettivo e in disfunzioni muscoloscheletriche, rendendolo un bersaglio utile per lo studio dei meccanismi di malattia guidati dalla matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL12A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL12A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL12A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL12A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL12A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL12A1 per lo studio della segnalazione di COL12A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL12A1 critici per la funzione di COL12A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL12A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL12A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL12A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL12A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL12A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL12A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL12A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL12A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.