COL11A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403512-ACT

COL11A1 codifica la catena α1 del collagene di tipo XI, un collagene fibrillare quantitativamente minoritario ma strutturalmente cruciale, che regola la nucleazione delle fibrille di collagene, il loro diametro e l’organizzazione della matrice extracellulare (ECM) nei tessuti connettivi. COL11A1 si integra in fibrille eterotipiche insieme ai collagene di tipo II e IX, sostenendo la biomeccanica della cartilagine e influenzando l’adesione cellula–matrice, la migrazione e le vie di meccanotrasduzione che modellano l’architettura tissutale. Un’alterata espressione di COL11A1 e il rimodellamento dell’ECM sono associati a fenotipi scheletrici dello sviluppo e sono stati collegati a programmi stromali associati ai tumori, nei quali la composizione della matrice può modulare la segnalazione legata all’invasione. Come componente della matrice, COL11A1 viene spesso studiato nel contesto dell’assemblaggio dell’ECM, della condrogenesi e della regolazione del comportamento cellulare dipendente dal microambiente.

COL11A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COL11A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

COL11A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COL11A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COL11A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di COL11A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COL11A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da COL11A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via COL11A1 nelle cellule tumorali con espressione di COL11A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.