Cochlin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405944

Panoramica

COCH codifica la coclina, una proteina secreta della matrice extracellulare fortemente arricchita nell’orecchio interno, dove contribuisce all’organizzazione strutturale e all’omeostasi meccanica dei tessuti uditivi e vestibolari. La coclina contiene domini LCCL e domini di tipo von Willebrand factor A che supportano le interazioni con la matrice e possono influenzare la segnalazione cellula–matrice, il rimodellamento tissutale e le risposte infiammatorie. Un’alterata funzione di COCH è associata a disturbi ereditari dell’udito e dell’equilibrio, e il deposito di coclina è stato collegato a cambiamenti degenerativi nella coclea e nell’apparato vestibolare. In quanto proteina associata alla matrice, la coclina viene studiata in vie che regolano l’assemblaggio della matrice extracellulare, la meccanotrasduzione e le risposte allo stress negli epiteli sensoriali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cochlin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COCH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COCH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COCH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cochlin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COCH per lo studio della segnalazione di Cochlin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COCH critici per la funzione di Cochlin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COCH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cochlin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cochlin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COCH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cochlin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cochlin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COCH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COCH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.