CNPase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402463

Panoramica

CNP codifica la 2’,3’-nucleotide ciclico 3’-fosfodiesterasi (CNPasi), un enzima associato alla mielina, arricchito negli oligodendrociti, che idrolizza i nucleotidi ciclici 2’,3’ e contribuisce alla formazione e al mantenimento della guaina mielinica. La CNPasi si localizza nella mielina non compatta e in microdomini citoscheletrici/di membrana, dove è collegata al metabolismo dell’RNA, all’estensione dei processi cellulari e alla regolazione della morfologia oligodendrogliale. Attraverso queste funzioni, la CNPasi supporta le interazioni assone–glia e la stabilità della mielina, intersecandosi con vie che regolano la differenziazione gliale e le risposte neuroinfiammatorie. Un’alterata espressione di CNP o attività della CNPasi è stata associata a contesti demielinizzanti e neurodegenerativi, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici della biologia della sostanza bianca.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CNPase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CNP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CNP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CNP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CNPase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CNP per lo studio della segnalazione di CNPase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CNP critici per la funzione di CNPase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CNP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CNPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CNPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CNP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CNPase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CNPase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CNP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CNP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.