CNP-53 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403527

Panoramica

NPPC codifica il peptide natriuretico di tipo C e l’isoforma CNP-53 è un peptide secreto bioattivo che segnala principalmente attraverso il recettore del peptide natriuretico 2 (NPR2/guanilato ciclasi B), aumentando i livelli intracellulari di cGMP. Questa via regola l’ossificazione endocondrale e l’omeostasi della cartilagine, modula il tono vascolare e la funzione endoteliale e influenza l’attività dei fibroblasti e il rimodellamento della matrice extracellulare. La segnalazione CNP/NPR2 interseca le reti MAPK e ossido nitrico–cGMP, plasmando programmi di proliferazione e differenziamento in tipi cellulari mesenchimali e vascolari. Un’attività di NPPC deregolata è stata associata a fenotipi della cartilagine di accrescimento e dello sviluppo scheletrico, nonché a processi cardiometabolici e fibrotici rilevanti per la modellizzazione delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CNP-53 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPPC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPPC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPPC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CNP-53.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPPC per lo studio della segnalazione di CNP-53, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NPPC critici per la funzione di CNP-53
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPPC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CNP-53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CNP-53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPPC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CNP-53 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CNP-53 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPPC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPPC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.