CNOT6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406273

Panoramica

CNOT6 (subunità 6 del complesso trascrizionale CCR4-NOT) è una deadenilasi catalitica all’interno del complesso CCR4–NOT che accorcia le code poli(A) degli mRNA per avviare la degradazione dei trascritti e modulare la traduzione. Regolando la stabilità degli mRNA, CNOT6 contribuisce al controllo genico post-trascrizionale in numerosi pathway che governano la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress, la differenziazione e la segnalazione dell’immunità innata. La sua attività si integra con il silenziamento mediato da miRNA e con reti più ampie di sorveglianza dell’RNA, plasmando la dinamica del trascrittoma in risposta ai segnali cellulari. La disregolazione della deadenilazione dipendente da CCR4–NOT, inclusa un’alterazione della funzione o dell’espressione di CNOT6, è stata associata a programmi aberranti di espressione genica rilevanti per la biologia del cancro e per fenotipi legati al sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CNOT6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CNOT6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CNOT6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CNOT6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CNOT6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CNOT6 per lo studio della segnalazione di CNOT6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CNOT6 critici per la funzione di CNOT6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CNOT6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CNOT6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CNOT6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CNOT6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CNOT6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CNOT6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CNOT6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CNOT6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.