Plásmido CRISPR de Activación (h) CMTM4: sc-405296-ACT

CMTM4 (proteína 4 de la familia CMTM que contiene un dominio transmembrana MARVEL similar a CKLF) es una proteína de membrana multipaso de la familia CMTM implicada en la regulación de la organización de la membrana, el tráfico endosomal y la señalización relacionada con el sistema inmunitario. A través de su dominio MARVEL, CMTM4 contribuye al control de la estabilidad y el recambio de proteínas de superficie, incluida la modulación de la abundancia de PD-L1 mediante las vías endosoma–lisosoma, influyendo así en la comunicación célula–célula y en los mecanismos de evasión inmunitaria. La expresión de CMTM4 se ha vinculado a programas de diferenciación celular y respuestas al estrés, y se ha informado de una regulación alterada en múltiples contextos de cáncer. Estas propiedades convierten a CMTM4 en un nodo útil para estudiar el tráfico de membrana, la regulación de puntos de control inmunitarios y las interacciones tumor–inmunidad en sistemas modelo humanos.

CMTM4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CMTM4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CMTM4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CMTM4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CMTM4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CMTM4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CMTM4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CMTM4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CMTM4 en células tumorales con expresión de CMTM4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.