CMTM4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405296-ACT

CMTM4 (proteina 4 contenente il dominio transmembrana MARVEL simile a CKLF) è una proteina di membrana multipasso della famiglia CMTM, implicata nella regolazione dell’organizzazione della membrana, del traffico endosomiale e della segnalazione correlata al sistema immunitario. Attraverso il suo dominio MARVEL, CMTM4 contribuisce al controllo della stabilità e del turnover delle proteine di superficie, inclusa la modulazione dell’abbondanza di PD-L1 tramite le vie endosoma–lisosoma, influenzando così la comunicazione cellula–cellula e i meccanismi di evasione immunitaria. L’espressione di CMTM4 è stata collegata a programmi di differenziazione cellulare e a risposte allo stress, e una sua regolazione alterata è stata riportata in molteplici contesti tumorali. Queste caratteristiche rendono CMTM4 un nodo utile per studiare il traffico di membrana, la regolazione dei checkpoint immunitari e le interazioni tumore–sistema immunitario in sistemi modello umani.

CMTM4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CMTM4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CMTM4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CMTM4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CMTM4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CMTM4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CMTM4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CMTM4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CMTM4 nelle cellule tumorali con espressione di CMTM4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.