Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CMAS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409575
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CMAS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CMAS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CMAS Antibody (E-8): sc-398296
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CMAS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409575 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CMAS codifica la citidina monofosfato N-acetilneuraminico acido sintetasi, un enzima nucleare che catalizza la conversione di Neu5Ac in CMP-Neu5Ac, il substrato donatore attivato necessario per le reazioni di sialilazione nell’apparato di Golgi. Controllando la disponibilità di CMP–acido sialico, CMAS influenza la sialilazione di glicoproteine e glicolipidi, con effetti sulle interazioni cellula–cellula, sulla segnalazione dei recettori, sul riconoscimento immunitario e sulla stabilità delle proteine alla membrana plasmatica. L’attività di CMAS collega il metabolismo centrale dei carboidrati alla biosintesi dei glicoconiugati nella via dell’acido sialico e in reti di glicosilazione più ampie. Pattern di sialilazione alterati associati a una funzione deregolata di CMAS sono rilevanti per studi su disordini congeniti della glicosilazione, fenotipi di neurosviluppo e rimodellamento della superficie cellulare nelle cellule tumorali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CMAS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CMAS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CMAS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CMAS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CMAS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CMAS per lo studio della segnalazione di CMAS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CMAS critici per la funzione di CMAS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CMAS per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CMAS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CMAS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CMAS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CMAS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CMAS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CMAS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CMAS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.