Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ClpP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424769
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ClpP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ClpP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ClpP Antibody (B-12): sc-271284
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ClpP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424769 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Clpp codifica la subunità proteolitica mitocondriale ClpP della peptidasi caseinolitica ATP‑dipendente, una proteasi a serina che collabora con l’unfoldasi ClpX per rimuovere proteine danneggiate o mal ripiegate e mantenere la proteostasi all’interno della matrice. Questo asse di controllo qualità sostiene la capacità di fosforilazione ossidativa, limita lo stress proteotossico e ossidativo e influenza la segnalazione della risposta mitocondriale alle proteine non correttamente ripiegate (mtUPR). L’attività di ClpP è collegata a vie che regolano il metabolismo energetico, la biogenesi mitocondriale e programmi trascrizionali di adattamento allo stress. Una funzione di CLPP deregolata è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale ed è spesso studiata in modelli di neurodegenerazione, malattie metaboliche e rimodellamento mitocondriale associato al cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ClpP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Clpp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Clpp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Clpp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ClpP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Clpp per lo studio della segnalazione di ClpP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Clpp critici per la funzione di ClpP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Clpp per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ClpP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ClpP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Clpp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ClpP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ClpP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Clpp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Clpp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.