CLK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402793-NIC

La CLK1 umana (CDC-like kinase 1) è una chinasi a doppia specificità che fosforila le proteine ricche in serina/arginina (SR) e altri fattori di splicing per regolare la dinamica dello spliceosoma e lo splicing alternativo del pre‑mRNA. Modulando l’inclusione degli esoni, la processazione dell’RNA e le isoforme trascrittomiche a valle, CLK1 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e i programmi trascrizionali legati alla segnalazione proliferativa. L’attività di CLK1 interseca vie del metabolismo dell’RNA e reti di regolazione genica post-trascrizionale che modellano la diversità del proteoma nei diversi tessuti. La disregolazione del controllo dello splicing mediato da CLK1 è stata associata a pattern aberranti di espressione di isoforme osservati in ambiti di ricerca sulla biologia del cancro e sulle malattie neurologiche, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare fenotipi dipendenti dallo splicing.

CLK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLK1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.