CLIP4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413231-LAC

CLIP4 umano (CAP-Gly domain–containing linker protein 4) codifica un fattore associato ai microtubuli, implicato nel coordinamento dell’organizzazione del citoscheletro e del trasporto intracellulare tramite interazioni con la dinamica dell’estremità “plus” dei microtubuli. Influenzando la stabilità dei microtubuli e processi dipendenti dal traffico come la polarità e la divisione cellulare, CLIP4 può incidere su vie che collegano il rimodellamento del citoscheletro alla trasduzione del segnale e al posizionamento degli organelli. Pattern di espressione alterati di proteine regolatrici dei microtubuli, inclusi membri della famiglia CLIP, sono stati riportati in diversi stati cellulari proliferativi e di adattamento allo stress, sostenendo l’interesse a studiare CLIP4 in contesti quali migrazione, fedeltà mitotica e stabilità del genoma. Queste caratteristiche biologiche rendono CLIP4 un bersaglio utile per studi meccanicistici della regolazione dipendente dai microtubuli nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CLIP4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CLIP4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CLIP4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CLIP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CLIP4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CLIP4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.