CLIP-170 Plasmide Double Nickase (m): sc-425158-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLIP-170 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CLIP-170 Double Nickase Plasmid (m) e il CLIP-170 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Clip1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLIP-170 Antibody (F-3): sc-28325
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLIP-170 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425158-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLIP-170 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-425158-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Clip1 codifica CLIP-170, una proteina che traccia l’estremità “plus” dei microtubuli e che si lega alle end-binding proteins, collegando i microtubuli dinamici a fattori corticali e associati agli organelli. CLIP-170 regola la polimerizzazione dei microtubuli, la cattura dei cinetocori e il traffico vescicolare dipendente dai microtubuli, influenzando la polarità cellulare, la migrazione e la progressione mitotica. Coordinando il rimodellamento del citoscheletro e il trasporto intracellulare, CLIP-170 contribuisce a modellare gli output di segnalazione che dipendono dall’organizzazione spaziale, incluse le vie che controllano l’adesione e la fedeltà del checkpoint del fuso. La disregolazione della dinamica dei microtubuli e dei processi associati al traffico è ampiamente rilevante per fenotipi proliferativi e di neurosviluppo, rendendo Clip1 un bersaglio utile per studi meccanicistici del controllo del citoscheletro.
CLIP-170 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Clip1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Clip1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Clip1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Clip1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.