Plasmide Double Nickase (m) CLIP-170: sc-425158-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CLIP-170 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLIP-170 Double Nickase (m) et le plasmide CLIP-170 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Clip1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLIP-170 Antibody (F-3): sc-28325
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CLIP-170 | sc-425158-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CLIP-170 | sc-425158-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Clip1 chez la souris code CLIP-170, une protéine de suivi de l’extrémité plus des microtubules qui se lie aux protéines « end-binding » (EB) et relie les microtubules dynamiques à des facteurs corticaux et associés aux organites. CLIP-170 régule la polymérisation des microtubules, la capture des kinétochores et le transport vésiculaire dépendant des microtubules, influençant la polarité cellulaire, la migration et la progression mitotique. En coordonnant le remodelage du cytosquelette et le transport intracellulaire, CLIP-170 contribue à façonner des sorties de signalisation dépendantes de l’organisation spatiale, notamment des voies contrôlant l’adhérence et la fidélité du point de contrôle du fuseau. La dérégulation de la dynamique des microtubules et des processus associés au trafic est largement pertinente pour des phénotypes prolifératifs et neurodéveloppementaux, faisant de Clip1 une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle du cytosquelette.
CLIP-170 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Clip1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Clip1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Clip1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Clip1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.