CLIC2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409129-ACT

CLIC2 (chloride intracellular channel 2) è un membro della famiglia CLIC, implicato nella conduzione intracellulare del cloruro e nell’associazione alle membrane sensibile allo stato redox, contribuendo all’omeostasi ionica nei compartimenti endomembranosi. È stato collegato alla regolazione del rilascio di Ca²⁺ dipendente dal recettore della rianodina e, più in generale, alle dinamiche della segnalazione del calcio che influenzano eccitabilità, secrezione e risposte allo stress. Nei tessuti umani, l’espressione di CLIC2 è arricchita in contesti cardiovascolari e neurali, in linea con ruoli nella fisiologia muscolare e neuronale. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CLIC2 sono state associate a fenotipi di neurosviluppo e a disfunzione cardiaca, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione dei canali ionici e delle reti di segnalazione.

CLIC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLIC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLIC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLIC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLIC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLIC2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLIC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLIC2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLIC2 nelle cellule tumorali con espressione di CLIC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.