CLC-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403513-NIC

CLCN2 codifica il canale del cloruro voltaggio-dipendente CLC-2, un canale anionico della membrana plasmatica che contribuisce all’omeostasi del cloruro, all’eccitabilità di membrana e alla regolazione del trasporto ionico epiteliale e neuronale. L’attività di CLC-2 influenza il controllo del volume cellulare, il movimento transepiteliale dei fluidi e la stabilità elettrica grazie al coordinamento con altri trasportatori e canali in processi quali l’equilibrio osmotico e la funzione di barriera. Alterazioni della funzione di CLCN2 sono state associate a disturbi che coinvolgono il trasporto epiteliale e la fisiologia del sistema nervoso, a conferma della sua rilevanza nello studio delle canalopatie e della regolazione dei flussi ionici specifici dei tessuti. Essendo un canale ampiamente espresso, CLC-2 è spesso studiato in contesti che includono la fisiologia epiteliale, la segnalazione gliale e neuronale e i meccanismi che collegano i gradienti ionici alle risposte cellulari allo stress.

CLC-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLCN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLCN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLCN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLCN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.