claudin-6 Plasmide Double Nickase (h): sc-403405-NIC

Il gene umano **CLDN6** codifica la claudina-6, un componente transmembrana a quattro passaggi dei filamenti delle tight junctions (giunzioni serrate), che regola la permeabilità paracellulare e l’integrità della barriera epiteliale. La claudina-6 partecipa all’organizzazione dei complessi giunzionali e ai programmi di polarità attraverso interazioni con proteine di impalcatura (scaffold) come i membri della famiglia ZO, collegando l’architettura di membrana alla dinamica del citoscheletro. La sua espressione è regolata durante lo sviluppo ed è spesso associata agli stati di differenziazione epiteliale, rendendo **CLDN6** un marker utile per studi di linea cellulare e stato cellulare. La deregolazione della segnalazione delle giunzioni serrate e le alterazioni dei pattern di espressione delle claudine sono ampiamente implicate nel rimodellamento epiteliale e in cambiamenti associati ai tumori in termini di adesione, invasione e funzione di barriera, a supporto dell’indagine di **CLDN6** in modelli rilevanti per la malattia.

claudin-6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLDN6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLDN6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLDN6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLDN6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.