claudin-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403405

Panoramica

CLDN6 codifica la claudina-6, una proteina delle tight junctions a quattro passaggi transmembrana che contribuisce alla formazione della barriera epiteliale e al controllo della permeabilità paracellulare attraverso l’assemblaggio di filamenti basati sulle claudine. Regolando l’adesione cellula-cellula, la polarità e la segnalazione a livello delle giunzioni, la claudina-6 può influenzare processi legati alla differenziazione epiteliale, alla migrazione e all’organizzazione dei tessuti. Un’alterazione dell’espressione di CLDN6 è stata riportata in diversi contesti tumorali, dove viene spesso studiata in relazione al rimodellamento delle giunzioni, ai cambiamenti dello stato epiteliale e alle vie associate all’invasione. Poiché CLDN6 è regolato durante lo sviluppo ed è spesso poco o per nulla espresso nei tessuti adulti, viene anche utilizzato come marcatore per indagare programmi di linea e fenotipi giunzionali in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLDN6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLDN6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLDN6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina claudin-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLDN6 per lo studio della segnalazione di claudin-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLDN6 critici per la funzione di claudin-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLDN6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal claudin-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal claudin-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLDN6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal claudin-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR claudin-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLDN6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLDN6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.