claudin-6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403405-ACT

CLDN6 codifica la claudina-6, una proteina tetraspan delle giunzioni serrate che contribuisce alla formazione della barriera epiteliale, alla polarità apico-basale e alla permeabilità paracellulare selettiva. Partecipando a complessi di tight junction con altre claudine e con proteine di impalcatura come TJP1/ZO-1, la claudina-6 aiuta a coordinare l’adesione cellula-cellula e la segnalazione a livello giunzionale, in interfaccia con i programmi di differenziamento e la morfogenesi epiteliale. Un’alterata espressione di CLDN6 è stata riportata in diversi contesti oncologici e in modelli di sviluppo, nei quali una regolazione anomala dell’integrità delle giunzioni serrate può influenzare l’invasione, fenotipi associati alla metastasi e la plasticità epiteliale. Di conseguenza, CLDN6 è spesso studiato come marcatore e regolatore funzionale del rimodellamento giunzionale e delle transizioni dello stato di linea in sistemi epiteliali umani.

claudin-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLDN6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

claudin-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLDN6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLDN6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di claudin-6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLDN6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da claudin-6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via claudin-6 nelle cellule tumorali con espressione di CLDN6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.