claudin-11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401859

Panoramica

CLDN11 codifica per la claudina-11, una proteina delle giunzioni serrate a quattro segmenti transmembrana che forma barriere paracellulari e regola la permeabilità selettiva in epiteli specializzati. La claudina-11 è un componente chiave dell’architettura dei filamenti delle giunzioni serrate nelle cellule gliali mielinizzanti e nelle giunzioni delle cellule del Sertoli nel testicolo, sostenendo la polarità cellulare e la compartimentalizzazione dei tessuti. Attraverso i processi di assemblaggio delle giunzioni serrate e di mantenimento della barriera, CLDN11 influenza l’integrità epiteliale, l’omeostasi ionica e la segnalazione dell’adesione cellula–cellula. Alterazioni dell’espressione di CLDN11 o dell’organizzazione delle giunzioni vengono studiate in contesti di disfunzione di barriera e differenziazione deregolata, con rilevanza per la biologia della mielinizzazione del sistema nervoso e l’omeostasi dei tessuti riproduttivi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLDN11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLDN11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLDN11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina claudin-11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLDN11 per lo studio della segnalazione di claudin-11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLDN11 critici per la funzione di claudin-11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLDN11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal claudin-11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal claudin-11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLDN11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal claudin-11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR claudin-11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLDN11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLDN11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.